Você também pode dessalinizar sua amostra por ultrafiltração a 1 décimo do volume anterior, diluir novamente e repetir a etapa de UF. O melhor método para dessalinização é dess alting por filtração em gel contra tampão 50 mM, do que ultrafiltração (clássica, não centrífuga).
O que é dessalinização na purificação de proteínas?
A dessalinização é usada para remover sais de soluções de proteínas, fenol ou nucleotídeos não incorporados de ácidos nucleicos ou excesso de reticulação ou reagentes de marcação de proteínas conjugadas.
Como você purifica as proteínas?
Na purificação de proteínas em massa, um primeiro passo comum para isolar proteínas é precipitação com sulfato de amônio (NH4) 2SO4. Isso é realizado adicionando quantidades crescentes de sulfato de amônio e coletando as diferentes frações de proteína precipitada. Subsequentemente, o sulfato de amônio pode ser removido por diálise.
Como você protege as proteínas de troca?
A troca de tampão, no entanto, é realizada primeiro equilibrando com a resina da coluna com o tampão no qual a amostra deve terminar. Em ambos os casos, os constituintes do tampão que transportam a amostra para a coluna será substituída pela solução com a qual a coluna é pré-equilibrada.
Qual das seguintes técnicas de cromatografia pode ser aplicada para dessalinização de proteínas?
Como mencionado acima, filtração em gel pode ser efetivamente utilizada para proteínasdessalinização e é realizado equilibrando primeiro a coluna de filtração em gel com água. No entanto, a troca do tampão é realizada equilibrando primeiro a resina da coluna com o tampão alvo.
