Artefatos de dímero de primer normalmente ocorrem em um grande número de ciclo de limiar (geralmente > 35 ciclos), que é maior que o número de ciclo de limiar para o amplicon desejado. Os dímeros de primer aumentam acentuadamente quando o DNA genômico heterólogo é adicionado.
Onde você veria dímeros de primer em um gel de DNA?
Na PCR de ponto final não quantitativo, o dímero do primer aparecerá como um esfregaço mais ou menos fraco em um gel de agarose, abaixo da banda do produto de interesse.
Como são formados os dímeros de primer?
Os dímeros de primers formam quando dois primers se ligam um ao outro, em vez de ao DNA molde, devido a regiões de complementaridade do primer.
Como você detecta dímeros de primer?
A maneira mais fácil de verificar se há dímeros de primer é para comparar suas reações com seu controle negativo (água em vez de DNA ou RNA). Os dímeros de primer ainda se formarão no controle negativo. Alguns conjuntos de primers são mais propensos a formar dímeros do que outros.
Por que os dímeros de primer aparecem?
A maioria dos dímeros de primer são vistos devido à alta concentração do primer na mistura de reação de PCR. Ou se não houver amplificação por PCR e você puder ver no dímero do primer no gel de agarose. Se conseguir ver o produto de PCR, você pode reduzir a concentração do prime e manter as outras condições iguais.
