Como inativar a tripsina?

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Como inativar a tripsina?
Como inativar a tripsina?
Anonim

Uma vez que as células aparecem destacadas, adicione 2 volumes de meio de crescimento completo pré-aquecido para inativar a tripsina. Dispersar suavemente o meio pipetando sobre a superfície da camada celular várias vezes para garantir a recuperação de >95% das células.

Como faço para interromper a atividade da tripsina?

A digestão da tripsina pode ser interrompida por congelamento ou diminuindo o pH da reação abaixo de pH 4 adicionando ácido fórmico, acético ou trifluoroacético (a tripsina recuperará a atividade quando o pH é elevado acima de pH 4). As amostras digeridas podem ser armazenadas a -20°C.

O que neutraliza a tripsina?

Um tampão contendo íons cálcio e magnésio também diminuirá a atividade da tripsina. No entanto, o FBS é a maneira mais eficaz de inibir a atividade da tripsina.

O soro inativa a tripsina?

O soro inativa a tripsina residual remanescente da digestão enzimática dos rins e as enzimas proteolíticas posteriormente sintetizadas pelas células. As células recém-tripsinizadas podem ser cultivadas em monocamadas na ausência de soro, desde que sejam lavadas repetidamente para remover a tripsina residual.

Quanta mídia é necessária para desativar a tripsina?

Contanto que você esteja usando pelo menos 1:1 proporção de 5-10% soro meio contendo sua tripsina, deve haver inibição mais do que suficiente, seguida de centrifugação e troca do meio com meio fresco.

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