Primeiro de tudo, tanto EcoR1 quanto Xba1 deixam saliências 5' quando digerem DNA (assim como Nde1). Em ambos os casos, a extremidade 3' é rebaixada, razão pela qual a poliermase pode adicionar bases. Em segundo lugar, todas as polimerases só podem adicionar bases a uma extremidade 3', então o Klenow adicionará 4 bases à extremidade 3' recuada de ambos os locais para gerar extremidades cegas.
As enzimas de restrição deixam um 5 fosfato?
Vetores e insertos digeridos por enzimas de restrição contêm as modificações terminais necessárias (5' fosfato e 3' hidroxila), enquanto os fragmentos criados pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) não podem.
As pontas rombas podem ser ligadas?
Ligadura da extremidade romba
A ligadura da extremidade romba não envolve o emparelhamento de bases das extremidades salientes, portanto qualquer extremidade romba pode ser ligada a outra extremidade romba. Extremidades cegas podem ser geradas por enzimas de restrição como SmaI e EcoRV.
A Taq polimerase produz pontas cegas?
Yes… A Taq Polymerase adiciona Saliências A se você mantiver a etapa de extensão final em 72 dC na PCR. Usado principalmente para clonagem de TA.
Por que usar o fragmento Klenow no sequenciamento de DNA?
O fragmento Klenow é extremamente útil para tarefas baseadas em pesquisa, como: Síntese de DNA de fita dupla a partir de modelos de fita simples . Preenchendo as extremidades 3' recuadas dos fragmentos de DNA para tornar a saliência 5' romba . Digestão de saliências salientes de 3'.
